生物安全柜的使用及維護方法
(一)準備工作
1.在開始工作以前，要清除生物安(an)全柜內(nei)表(biao)面的污染。
2.將所有必需(xu)的物(wu)品置(zhi)于安全柜內，以盡可(ke)能減少雙臂進(jin)出(chu)前面開口的次數。物(wu)品放置(zhi)要注(zhu)意以下幾點(dian)：
①II級生物安全柜臺面(mian)前面(mian)和后(hou)面(mian)的(de)進氣格(ge)柵不能被物品阻擋。
②所有物品應盡可(ke)能地放在工作(zuo)臺后(hou)部靠近工作(zuo)臺邊緣的位置，并(bing)使其在操作(zuo)中不會阻擋(dang)后(hou)部格柵。
③可產生(sheng)氣溶膠的(de)設(she)備(如：混勻器、離心機等(deng))應靠近(jin)安(an)全(quan)柜(ju)的(de)后部(bu)放(fang)置(zhi)。有生(sheng)物危害性(xing)的(de)廢(fei)棄物袋、盛放(fang)廢(fei)棄吸管(guan)的(de)盤(pan)子(zi)等(deng)體積較大的(de)物品(pin)，應該(gai)放(fang)在安(an)全(quan)柜(ju)內(nei)的(de)某一側。
④潔凈的(de)物品應放置在距離產生氣溶膠器(qi)皿至少(shao)15 cm外，降(jiang)低(di)交(jiao)叉(cha)污染的(de)可能(neng)性。
⑤容易(yi)受紫外(wai)線損(sun)傷的實(shi)驗(yan)樣本可以在(zai)紫外(wai)線殺菌后的實(shi)驗(yan)之(zhi)前放(fang)入。
⑥不(bu)要(yao)在(zai)工作(zuo)區內排(pai)放(fang)過(guo)多的物品。
3.關閉操作(zuo)前窗，打開生(sheng)物(wu)安全柜的(de)紫外燈(deng)，對生(sheng)物(wu)安全柜工作(zuo)臺面，側(ce)壁(bi)(bi)表面以及(ji)后(hou)壁(bi)(bi)內側(ce)進行殺菌(jun)處(chu)理(li)。
4.稍微打開操作(zuo)前窗，讓生物(wu)安(an)全柜工作(zuo)區排氣幾分鐘之后再(zai)開始(shi)工作(zuo)。
(二)操作注意事項
1.在(zai)使用生物安全(quan)柜時應(ying)穿(chuan)著個(ge)體(ti)防護(hu)服并(bing)戴(dai)手(shou)(shou)套防止被污染。在(zai)進(jin)行一級(ji)和(he)二級(ji)生物安全(quan)水平的操(cao)作時，可(ke)穿(chuan)著普通實(shi)驗(yan)服。手(shou)(shou)套應(ying)套在(zai)實(shi)驗(yan)服袖口(kou)(kou)外面(mian)。有些操(cao)作可(ke)能還需要戴(dai)口(kou)(kou)罩和(he)護(hu)目鏡。
2.在(zai)(zai)(zai)生物(wu)(wu)安全柜(ju)內，避免(mian)使(shi)用酒精燈等(deng)明火滅菌器。使(shi)用明火會對(dui)氣流產生影響，并且在(zai)(zai)(zai)處理揮發(fa)性(xing)物(wu)(wu)品和易(yi)燃物(wu)(wu)品時，也易(yi)造成(cheng)危險。在(zai)(zai)(zai)對(dui)接種(zhong)環(huan)進行滅菌時，可以使(shi)用紅外線電加熱器(見圖(tu)1),或者干(gan)脆使(shi)用一次性(xing)塑料接種(zhong)環(huan)。
3.手(shou)和雙(shuang)臂伸入到生物(wu)安全柜(ju)中等待大約(yue)1min,以便(bian)安全柜(ju)調整完畢并(bing)且讓(rang)里面的(de)空氣“掃過(guo)”手(shou)和雙(shuang)臂的(de)表面以后，才(cai)可以開(kai)始對物(wu)品進行處(chu)理。
4.工作時(shi)，盡量減少手臂的(de)移動，移動時(shi)要緩(huan)慢，防止干擾柜(ju)內(nei)氣(qi)流。在移動雙(shuang)臂進(jin)出安全柜(ju)時(shi)，需(xu)要小心(xin)維持前面開(kai)口處氣(qi)流的(de)完整性，雙(shuang)臂應該與(yu)工作區(qu)開(kai)口垂直地緩(huan)慢進(jin)出前面的(de)開(kai)口。
5.在(zai)工作(zuo)臺面(mian)上的(de)實(shi)驗操作(zuo)應該按照從清潔區到污染(ran)區的(de)方向進(jin)行，所(suo)有操作(zuo)在(zai)工作(zuo)臺面(mian)的(de)中后部(bu)進(jin)行。
6.工作時，耐高壓滅菌的生物危害性(xing)廢棄(qi)物袋以及吸管盛放盤放在(zai)(zai)安(an)(an)全(quan)柜(ju)內不能拿出安(an)(an)全(quan)柜(ju)，否則在(zai)(zai)使用這(zhe)(zhe)些物品(pin)時雙臂就必須頻(pin)繁(fan)進出安(an)(an)全(quan)柜(ju)，這(zhe)(zhe)樣會干(gan)擾安(an)(an)全(quan)柜(ju)空氣屏障(zhang)的完整性(xing)，從而影(ying)響對人員和物品(pin)的防護(hu)。
7.一(yi)旦實驗(yan)過(guo)程中產生溢灑物，用消毒(du)紙巾(jin)置于其表(biao)面吸附清理(li)。
8.盡量使安全柜(ju)處(chu)于(yu)持續(xu)工作狀態，并對所有物品(pin)進(jin)行(xing)表面消(xiao)毒(du)處(chu)理，提供zui大(da)程度(du)的(de)人員保護。從(cong)安全柜(ju)內部拿(na)取可能產生污染的(de)物品(pin)時，一(yi)定要進(jin)行(xing)表面消(xiao)毒(du)處(chu)理。
(三)使用完畢后的處理
1.系緊用過(guo)的生物廢物袋。
2.對安全柜內壁、后壁、工作臺面(mian)和(he)前窗(chuang)內側(ce)進行清(qing)潔和(he)消毒處理。
3.由于(yu)剩余的培(pei)養基可能會使微(wei)生物生長繁殖，因此在實(shi)驗結束時，包括儀(yi)器(qi)設(she)備在內的所有物品都(dou)應清除表面污染，并移(yi)出安全柜。
4.從(cong)安全柜(ju)內移出手臂之前，一定要(yao)進(jin)行表(biao)面消毒處理(li)，然后垂直于工作區開口緩慢地移出。
6.在(zai)每(mei)次使用后，要(yao)清除生物安(an)全(quan)柜內(nei)表面的污(wu)染。工作臺面和內(nei)壁要(yao)用消毒劑(ji)進行擦拭(shi)，所(suo)用的消毒劑(ji)要(yao)能夠殺死安(an)全(quan)柜里(li)的任何微生物。在(zai)每(mei)天實驗結(jie)束(shu)時，應擦拭(shi)生物安(an)全(quan)柜的工作臺面、四周以及玻璃的內(nei)外側等部位(wei)來(lai)清除表面的污(wu)染。在(zai)對(dui)目標生物體有效(xiao)時，可(ke)以采用漂白劑(ji)溶液或(huo)70%酒精(jing)來(lai)消毒。在(zai)使用如漂白劑(ji)等腐蝕性消毒劑(ji)后，還必須用無菌水再次進行擦拭(shi)。
7.關閉前操作窗口并開啟紫外燈。
(四)生物安全柜內溢灑的處理
處理溢(yi)灑物時(shi)不要(yao)將頭伸入安(an)全(quan)柜(ju)內，也不要(yao)將臉直接面(mian)對前操作口，而應處于(yu)前視面(mian)板(ban)的(de)后方。選擇消毒滅菌劑時(shi)需要(yao)考慮(lv)其(qi)對生(sheng)物安(an)全(quan)柜(ju)的(de)腐蝕(shi)性。
如果溢灑的量不(bu)足1 ml時，可直接用消毒(du)滅菌劑浸濕的紙巾(jin)(或其他材料)擦拭(shi)。
如(ru)(ru)果(guo)溢(yi)灑(sa)(sa)(sa)量大或容器破損，建議按如(ru)(ru)下操作(zuo)(zuo)(zuo)(zuo)：使(shi)生(sheng)物(wu)安(an)全柜(ju)保持(chi)開(kai)啟狀(zhuang)態；在溢(yi)灑(sa)(sa)(sa)物(wu)上覆蓋浸有消(xiao)毒(du)滅(mie)(mie)(mie)菌劑(ji)(ji)的(de)吸收材料，作(zuo)(zuo)(zuo)(zuo)用(yong)(yong)一定(ding)時間以發揮(hui)消(xiao)毒(du)滅(mie)(mie)(mie)菌作(zuo)(zuo)(zuo)(zuo)用(yong)(yong)，必(bi)要(yao)時，用(yong)(yong)消(xiao)毒(du)滅(mie)(mie)(mie)菌劑(ji)(ji)浸泡工作(zuo)(zuo)(zuo)(zuo)表面以及(ji)(ji)排水溝和(he)接(jie)液(ye)槽(cao)；在安(an)全柜(ju)內(nei)對(dui)所(suo)戴手套消(xiao)毒(du)滅(mie)(mie)(mie)菌后，脫(tuo)(tuo)下手套；如(ru)(ru)果(guo)防(fang)(fang)護(hu)服已被污染，脫(tuo)(tuo)掉所(suo)污染的(de)防(fang)(fang)護(hu)服后，用(yong)(yong)適(shi)當的(de)消(xiao)毒(du)滅(mie)(mie)(mie)菌劑(ji)(ji)清(qing)洗暴露(lu)部位；穿(chuan)好適(shi)當的(de)個體防(fang)(fang)護(hu)裝備，如(ru)(ru)雙層手套、防(fang)(fang)護(hu)服、護(hu)目鏡和(he)呼吸保護(hu)裝置等(deng)；小(xiao)心將(jiang)(jiang)吸收了溢(yi)灑(sa)(sa)(sa)物(wu)的(de)紙巾(jin)(或其他吸收材料)連同溢(yi)灑(sa)(sa)(sa)物(wu)收集(ji)到的(de)收集(ji)袋或容器中，并反(fan)復用(yong)(yong)新的(de)紙巾(jin)(或其他吸收材料)將(jiang)(jiang)剩余物(wu)質吸凈；破碎的(de)玻璃或其他銳(rui)器要(yao)用(yong)(yong)鑷(nie)子或鉗(qian)子處(chu)理(li)；用(yong)(yong)消(xiao)毒(du)滅(mie)(mie)(mie)菌劑(ji)(ji)擦拭或噴灑(sa)(sa)(sa)安(an)全柜(ju)內(nei)壁、工作(zuo)(zuo)(zuo)(zuo)表面以及(ji)(ji)前(qian)視(shi)窗的(de)內(nei)側(ce)；作(zuo)(zuo)(zuo)(zuo)用(yong)(yong)一定(ding)時間后，用(yong)(yong)潔凈水擦干凈消(xiao)毒(du)滅(mie)(mie)(mie)菌劑(ji)(ji)；如(ru)(ru)果(guo)需要(yao)浸泡接(jie)液(ye)槽(cao)，在清(qing)理(li)接(jie)液(ye)槽(cao)前(qian)要(yao)先報告主管人員(yuan)；可能需要(yao)用(yong)(yong)其他方式消(xiao)毒(du)滅(mie)(mie)(mie)菌后再(zai)進(jin)行清(qing)理(li)。如(ru)(ru)果(guo)溢(yi)灑(sa)(sa)(sa)物(wu)流入生(sheng)物(wu)安(an)全柜(ju)內(nei)部，需要(yao)評估(gu)后采取適(shi)用(yong)(yong)的(de)措施。
(五)定期維護
1.每三個月更換一(yi)次預過(guo)濾器。
2.每(mei)年(nian)更(geng)換一次紫外燈(deng)。
3.有下列情況(kuang)之一時，應對(dui)生物(wu)安全(quan)柜(ju)(ju)進(jin)(jin)(jin)行現(xian)場檢(jian)(jian)(jian)測(ce)：生物(wu)安全(quan)實驗(yan)室竣工后(hou)(hou)(hou)，投入使(shi)用(yong)前，生物(wu)安全(quan)柜(ju)(ju)已安裝完(wan)畢；生物(wu)安全(quan)柜(ju)(ju)被移動位置后(hou)(hou)(hou)；對(dui)生物(wu)安全(quan)柜(ju)(ju)進(jin)(jin)(jin)行檢(jian)(jian)(jian)修后(hou)(hou)(hou)；生物(wu)安全(quan)柜(ju)(ju)更(geng)換(huan)過(guo)濾器(qi)后(hou)(hou)(hou)；生物(wu)安全(quan)柜(ju)(ju)一年一度的(de)(de)(de)常規檢(jian)(jian)(jian)測(ce)。現(xian)場檢(jian)(jian)(jian)測(ce)應由(you)有資(zi)質的(de)(de)(de)專(zhuan)業人(ren)員按照生產(chan)商(shang)的(de)(de)(de)說明對(dui)每一臺生物(wu)安全(quan)柜(ju)(ju)的(de)(de)(de)運行性能以(yi)及(ji)完(wan)整性進(jin)(jin)(jin)行評估，以(yi)檢(jian)(jian)(jian)查其是否符(fu)合(he)國家標準(zhun)要求。安全(quan)柜(ju)(ju)防護效果(guo)的(de)(de)(de)評估應該包(bao)括對(dui)安全(quan)柜(ju)(ju)的(de)(de)(de)完(wan)整性、HEPA過(guo)濾器(qi)的(de)(de)(de)泄漏(lou)、垂(chui)直氣流(liu)的(de)(de)(de)速度、工作窗(chuang)口氣流(liu)流(liu)向和(he)平均風速、負壓/換(huan)氣次數、氣流(liu)的(de)(de)(de)煙霧(wu)模式以(yi)及(ji)警報和(he)互鎖系統(tong)進(jin)(jin)(jin)行測(ce)試(shi)(shi)。還可以(yi)選擇進(jin)(jin)(jin)行漏(lou)電(dian)、光照度、紫外強(qiang)度、噪音水(shui)平以(yi)及(ji)振動性測(ce)試(shi)(shi)。在進(jin)(jin)(jin)行這些測(ce)試(shi)(shi)時，檢(jian)(jian)(jian)測(ce)人(ren)員要經過(guo)專(zhuan)門的(de)(de)(de)培訓，采用(yong)專(zhuan)門的(de)(de)(de)技術和(he)儀(yi)器(qi)設備。強(qiang)烈建議由(you)有資(zi)質的(de)(de)(de)專(zhuan)業人(ren)員來進(jin)(jin)(jin)行測(ce)試(shi)(shi)。
每(mei)周采用空氣落(luo)菌(jun)數相似的方法進(jin)行(xing)無菌(jun)檢(jian)查。
生物安全(quan)柜在移動以及更換(huan)過濾器之前，必須清除污染。常用(yong)的方法是(shi)采(cai)用(yong)甲醛熏蒸,應該由(you)有資質的專業人員來清除污染。
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