1 實驗部分
1． 1 儀器與試劑
Agilent 1220 液相色譜(pu)儀(yi)，配自(zi)動進樣(yang)器，Agilent G1315B 二極管(guan)陣(zhen)列檢(jian)測器( 美國(guo)Agilent公(gong)司(si)) ; RE-2000 型旋轉蒸發器; KQ-5200 型超(chao)聲波清洗儀(yi); TGL-16M 型高速臺式(shi)冷凍(dong)離(li)心機; Milli-Q 去(qu)離(li)子水(shui)發生器( 美國(guo)Milli-Q 公(gong)司(si)) 。乙(yi)(yi)腈( 色譜(pu)純) ; 甲酸、乙(yi)(yi)酸銨、三乙(yi)(yi)胺(an)、冰醋酸( 分(fen)析純) ; C12-BAC、C14-BAC、C16-BAC( 純度≥99%，美國(guo)Sigma 公(gong)司(si)) 。樣(yang)品(pin): 本單(dan)位檢(jian)驗(yan)樣(yang)品(pin)。
1． 2 標(biao)準貯備溶(rong)液(ye)、工作溶(rong)液(ye)及緩沖(chong)溶(rong)液(ye)的配(pei)制
分(fen)別準確(que)稱(cheng)取C12-BAC、C14-BAC、C16-BAC 標(biao)(biao)準品各0. 1 g，至0. 000 1 g，用20%甲(jia)醇(chun)水溶(rong)(rong)液(ye)配成10 g /L 的標(biao)(biao)準儲備液(ye)，該溶(rong)(rong)液(ye)在4 ℃下保存(cun)。取適量的上述3 種標(biao)(biao)準儲備液(ye)，用含(han)0. 5% 甲(jia)酸(suan)的甲(jia)醇(chun)配成分(fen)別為5. 0、25、100. 0、500. 0、1 000. 0、3 000. 0 mg /L的混合(he)標(biao)(biao)準工作(zuo)溶(rong)(rong)液(ye)。乙(yi)酸(suan)銨緩沖溶(rong)(rong)液(ye): 稱(cheng)取3. 08 g 乙(yi)酸(suan)銨置于燒杯(bei)中，加水溶(rong)(rong)解并定容至1 000 mL，加1 mL 三(san)乙(yi)胺，用冰醋酸(suan)調節pH 至4. 0，過(guo)0. 45 μm 濾(lv)膜，待用。
1． 3 樣品處理方(fang)法
1． 3． 1 護發素等(deng)膏霜類樣品
稱(cheng)取(qu)0. 5 g 樣(yang)品，至0. 01 g，置于25 mL 比色管中，加入20 mL 含0. 5% 甲酸(suan)的甲醇(chun)超聲(sheng)波提(ti)取(qu)20 min，然后加入0．2 g 氯(lv)化鈉(na)，用含0. 5% 甲酸(suan)的甲醇(chun)定容至刻(ke)度，經(jing)濾紙過(guo)濾，吸取(qu)15 mL 濾液至100 mL 蒸發瓶內，并將其(qi)接至旋(xuan)轉器(qi)上，于45℃水浴中減壓蒸餾至干，然后準確用3 mL 含0. 5%甲酸(suan)的甲醇(chun)溶解(jie)，經(jing)濾紙過(guo)濾，過(guo)0. 45 μm 濾膜，濾液供(gong)HPLC 分析。
1． 3． 2 洗發(fa)水等(deng)液態樣品
稱(cheng)取1. 0 g 樣品(pin)，至(zhi)0. 01 g，置于10 mL 容量(liang)瓶中，加入9 mL 含(han)(han)0. 5% 甲酸的甲醇(chun)，超聲波提取10 min，用含(han)(han)0. 5%甲酸的甲醇(chun)定容至(zhi)刻度，經濾(lv)(lv)紙過(guo)濾(lv)(lv)，過(guo)0. 45 μm 濾(lv)(lv)膜，濾(lv)(lv)液供HPLC 分(fen)析。
1． 4 HPLC 條件
色譜柱(zhu): 資生堂(tang)CAPCELL PAK SCX 柱(zhu)( 250mm × 4. 6 mm，5 μm) ; 柱(zhu)溫: 30 ℃; 進樣量: 20 μL;檢測波長: 260 nm; 流動相: ( A) 乙(yi)腈和( B) 乙(yi)酸銨緩沖溶(rong)液( pH 4. 0) ; 梯度洗(xi)脫程(cheng)序: 0 ～ 15 min，100%A 線性(xing)降至75% A; 15 ～ 20 min，75% A; 20～ 26 min，100%A。流速(su): 1. 0 mL /min。
1． 5 定(ding)性(xing)定(ding)量方法
采用標準物(wu)質(zhi)的保留時間和峰(feng)掃描光(guang)譜純度(du)對(dui)照(zhao)兩種方式對(dui)樣品峰(feng)進(jin)行(xing)定(ding)性，以外(wai)標法(fa)定(ding)量。2 結(jie)果與討論(lun)
2． 1 樣品提取
為(wei)(wei)了(le)充(chong)分(fen)(fen)提(ti)(ti)取樣品(pin)(pin)中的苯扎(zha)氯(lv)銨(an)，本實(shi)驗(yan)先(xian)分(fen)(fen)別(bie)選(xuan)擇乙腈、甲醇、正己烷作(zuo)為(wei)(wei)樣品(pin)(pin)提(ti)(ti)取溶液(ye)進(jin)行提(ti)(ti)取，但試驗(yan)結果均不理想( 加標回收(shou)率低(di)于(yu)50%) 。考(kao)慮(lv)到(dao)苯扎(zha)氯(lv)銨(an)為(wei)(wei)弱堿(jian)性化合(he)物(wu)，經過反復(fu)試驗(yan)，發現(xian)含0. 5% 甲酸的甲醇能有效地(di)提(ti)(ti)取樣品(pin)(pin)中苯扎(zha)氯(lv)銨(an)( 平均加標回收(shou)率高(gao)于(yu)90%) ，因(yin)此(ci)選(xuan)擇此(ci)溶液(ye)作(zuo)為(wei)(wei)樣品(pin)(pin)提(ti)(ti)取液(ye)。此(ci)外(wai)，為(wei)(wei)了(le)提(ti)(ti)高(gao)方法的檢出限(xian)，本實(shi)驗(yan)選(xuan)擇將護發素等膏霜類樣品(pin)(pin)提(ti)(ti)取溶液(ye)旋轉蒸發富集后再進(jin)行色(se)譜分(fen)(fen)析。
2． 2 HPLC 條件的(de)優(you)化
2． 2． 1 色譜柱的選擇
考慮到苯(ben)扎氯(lv)銨(an)為季銨(an)鹽類陽離子，而且(qie)化(hua)妝(zhuang)品(pin)中基質(zhi)干擾較大，為了簡化(hua)樣品(pin)的前處理凈化(hua)步(bu)驟，本實驗選(xuan)擇SCX 陽離子色譜柱作為本方(fang)法的色譜分析柱。
2． 2． 2 流動相的(de)選擇
苯(ben)扎氯(lv)銨(an)為(wei)(wei)(wei)弱堿(jian)性(xing)化合(he)物，而且3 種苯(ben)扎氯(lv)銨(an)同(tong)系(xi)物的(de)性(xing)質極為(wei)(wei)(wei)相近(jin)，為(wei)(wei)(wei)了有利于色譜峰(feng)的(de)分離及峰(feng)形(xing)的(de)改善(shan)，本(ben)方法采用乙(yi)(yi)酸銨(an)緩沖(chong)溶液( pH4. 0) 和(he)乙(yi)(yi)腈為(wei)(wei)(wei)流(liu)動相，利用梯(ti)度洗脫的(de)方法提高(gao)分離效果，測試開始時，流(liu)動相中乙(yi)(yi)酸銨(an)緩沖(chong)溶液( pH4. 0) 與(yu)乙(yi)(yi)腈的(de)比例為(wei)(wei)(wei)0∶ 100，然后在(zai)0 ～ 15 min 內(nei)將二(er)者的(de)比例調(diao)整為(wei)(wei)(wei)25∶ 75，通過上述梯(ti)度，可以較(jiao)好地(di)分離3 種苯(ben)扎氯(lv)銨(an)同(tong)系(xi)物。
2． 2． 3 檢測波(bo)長的選(xuan)擇
對苯扎氯銨標準溶液分別用紫外光譜儀進行掃描，發現其在215 nm 和260 nm 附近處有共同較大吸收峰，215 nm處響應值比260 nm 響應值高10 倍左右，但是215 nm 為紫外區域的極限，大多數化合物在此有強吸收，因此從色譜測定角度考慮，本方法選擇260 nm 為檢測波長。在上述優化的色譜條件下得到了令人滿意的結果( 見圖1) 。
2． 3 標準曲線、線性范(fan)圍和檢出限
將(jiang)逐級(ji)稀釋(shi)的(de)(de)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)工作(zuo)液( 5. 0、25. 0、100. 0、500. 0、1 000. 0、3 000. 0 mg /L) 分(fen)別進樣20 μL，以(yi)分(fen)析物(wu)的(de)(de)質量濃度(du)x ( mg /L) 為橫坐標(biao)(biao)，峰面積y 為縱坐標(biao)(biao)進行(xing)線性(xing)回歸(gui)，在5. 0 ～ 3 000. 0 mg /L 范圍內得(de)到(dao)的(de)(de)線性(xing)關系: C12-BAC，y = 0. 847x － 1. 635( r = 0. 999 9) ; C14-BAC，y = 0. 580x － 0. 569 ( r =0. 999 9) ; C16-BAC， y = 1. 218x + 0. 568 ( r =0. 999 9) 。同時進行(xing)樣品添(tian)加(jia)試(shi)驗，以(yi)信(xin)噪(zao)比(bi)(bi)( S /N) 為3 確定(ding)3 種(zhong)苯(ben)扎(zha)氯銨同系物(wu)的(de)(de)檢出限(xian)，用空白(bai)樣品提取液進行(xing)實(shi)驗，在信(xin)噪(zao)比(bi)(bi)均大(da)于(yu)(yu)3 的(de)(de)條(tiao)件下，將(jiang)此(ci)添(tian)加(jia)量定(ding)為檢出限(xian)。在空白(bai)樣品( 護發素) 中添(tian)加(jia)200 mg /kg 的(de)(de)3 種(zhong)苯(ben)扎(zha)氯銨同系物(wu)混合標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)溶液，按1. 3. 1 節方法處(chu)理后，經測定(ding)6 個平(ping)(ping)行(xing)樣品中3 種(zhong)苯(ben)扎(zha)氯銨同系物(wu)的(de)(de)S /N 均大(da)于(yu)(yu)10，平(ping)(ping)均回收率大(da)于(yu)(yu)92%，相對(dui)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)偏差(cha)( RSD) 低于(yu)(yu)7%，因此(ci)將(jiang)200 mg /kg 定(ding)為方法的(de)(de)定(ding)量限(xian)。
2． 4 回(hui)收率和精密度
每組準確稱取空白護發素類樣品6 份，每份0. 50 g，共3 組，分別定量加入C12-BAC、C14-BAC、C16-BAC 標準品，添加水平分別為200、400、1 000mg /kg，按1. 3. 1 節方法制備后進行測定，結果見表1。從表1 中可看出，不同濃度的平均加標回收率為92. 5%～ 102. 1%，平均RSD 為3. 81%～ 6. 66%( n =6) ，滿足實驗要求。
利用(yong)本方法(fa)對市場銷售的(de)25 種(zhong)各類(lei)化(hua)妝(zhuang)品進(jin)行檢測，其(qi)(qi)中2 種(zhong)品牌的(de)洗發水檢出C14-BAC，含量分別為317. 74 mg /kg 和222. 18 mg /kg，其(qi)(qi)他各類(lei)化(hua)妝(zhuang)品未(wei)檢出目(mu)標化(hua)合(he)物(wu)。圖(tu)2 為其(qi)(qi)中一種(zhong)陽性樣品的(de)色譜圖(tu)。
結語
建立(li)了化妝品中(zhong)3 種(zhong)苯扎(zha)氯(lv)銨(an)同(tong)(tong)系(xi)物(wu)同(tong)(tong)時測定的HPLC 方法(fa)。通過(guo)對實驗條(tiao)件進行選擇和(he)優化，確定了色譜條(tiao)件，在20 min內(nei)3 種(zhong)苯扎(zha)氯(lv)銨(an)同(tong)(tong)系(xi)物(wu)可(ke)達到*基線分離，而且能有效(xiao)地排除基質中(zhong)其(qi)他(ta)物(wu)質的干擾。方法(fa)的線性關系(xi)、回(hui)收率及精密度等各項參數表(biao)明，方法(fa)的靈(ling)敏度和(he)準確度均滿足實際樣品檢測的需要(yao)。該方法(fa)的樣品前(qian)處(chu)理(li)簡單易行，分析快(kuai)速，對化妝品中(zhong)3 種(zhong)苯扎(zha)氯(lv)銨(an)同(tong)(tong)系(xi)物(wu)能有效(xiao)的提取(qu)、分離和(he)測定，結果(guo)良好。
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